
在細(xì)菌全基因組測(cè)序(WGS)實(shí)驗(yàn)中,磁珠DNA純化是文庫(kù)制備的核心環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)手工操作不僅耗時(shí)費(fèi)力、易引入人為誤差,還會(huì)限制樣本通量與實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性。如今,Hamilton Microlab PuriFY自動(dòng)化純化平臺(tái)帶來全新解決方案,適配NGS文庫(kù)制備流程,大幅提升實(shí)驗(yàn)效率與測(cè)序質(zhì)量!

一、痛點(diǎn)直擊:手工純化的諸多難題
下一代測(cè)序文庫(kù)制備包含多步磁珠純化流程,人工操作短板十分突出:
操作步驟繁瑣,全程占用大量人力;
多批次樣本處理時(shí),人為失誤概率飆升;
磁珠殘留、操作不均等問題,間接影響下游測(cè)序結(jié)果;
吸頭等耗材消耗量大,實(shí)驗(yàn)成本居高不下。
為破解以上問題,本次聯(lián)合National Jewish Health開展對(duì)比實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證 Microlab PuriFY自動(dòng)化純化系統(tǒng)的應(yīng)用價(jià)值。
二、實(shí)驗(yàn)方案:自動(dòng)化VS手工,同臺(tái)對(duì)比

實(shí)驗(yàn)選取7株細(xì)菌分離株,采用QIAgen試劑盒提取基因組DNA,搭配Quantabio sparQ系列試劑盒構(gòu)建測(cè)序文庫(kù),分別設(shè)置手工純化組與Microlab PuriFY自動(dòng)化純化組,每組設(shè)置重復(fù)樣本與無模板對(duì)照(NTC)。
兩組嚴(yán)格按照對(duì)應(yīng)流程完成兩輪磁珠純化,從操作時(shí)長(zhǎng)、耗材用量、核酸濃度純度、文庫(kù)片段、測(cè)序數(shù)據(jù)五大維度開展綜合評(píng)估。
依托MagPore技術(shù)(雙磁鐵系統(tǒng)+正壓驅(qū)動(dòng)+專用純化條),自動(dòng)化系統(tǒng)可高效完成上清轉(zhuǎn)移、多次洗滌、核酸重懸與洗脫收集,大幅簡(jiǎn)化流程。
三、硬核實(shí)測(cè):多項(xiàng)數(shù)據(jù)優(yōu)秀
三、硬核實(shí)測(cè):多項(xiàng)數(shù)據(jù)優(yōu)秀
1. 人力&耗材大減負(fù),降本增效看得見
兩輪純化累計(jì)耗時(shí)對(duì)比:
手工操作:總計(jì)50分鐘
Microlab PuriFY:總計(jì)16分鐘
人工操作時(shí)長(zhǎng)縮減3.1倍,科研人員從重復(fù)機(jī)械操作中解放。
耗材消耗對(duì)比:
手工操作:總計(jì)使用79支吸頭
Microlab PuriFY:總計(jì)使用18支吸頭
吸頭用量減少4.4倍,有效降低實(shí)驗(yàn)耗材成本。
2. 文庫(kù)質(zhì)量穩(wěn)定,片段完整性優(yōu)異
通過Qubit、NanoDrop、Agilent TapeStation多重質(zhì)控檢測(cè):
核酸純度:兩組260/280、260/230吸光比值均處于合格區(qū)間,純度表現(xiàn)相當(dāng);

文庫(kù)濃度:自動(dòng)化組濃度均一性更強(qiáng),數(shù)據(jù)波動(dòng)更小;

片段長(zhǎng)度:手工組平均357.4bp,自動(dòng)化組平均393.7bp,文庫(kù)完整性更佳,片段分布符合測(cè)序要求。

同時(shí)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),手工流程易出現(xiàn)磁珠殘留,而Microlab PuriFY全程無磁珠攜帶污染,規(guī)避了雜質(zhì)對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干擾。平臺(tái)還具備自動(dòng)排障能力,遇到管路堵塞可自動(dòng)加壓疏通,實(shí)驗(yàn)容錯(cuò)率更高。
3. 測(cè)序表現(xiàn)跨越式提升,測(cè)序深度達(dá)標(biāo)無憂
采用Illumina MiSeq開展上機(jī)測(cè)序,核心數(shù)據(jù)差距顯著:
測(cè)序數(shù)據(jù)產(chǎn)量:自動(dòng)化組數(shù)據(jù)產(chǎn)出約為手工組的3倍,讀段數(shù)量大幅提升;
基因組覆蓋深度:手工樣本中位覆蓋深度僅25~33×,自動(dòng)化樣本可達(dá) 65~73×,輕松突破傳統(tǒng)方法瓶頸,穩(wěn)定實(shí)現(xiàn)>40×的理想測(cè)序深度;
測(cè)序質(zhì)量:兩組Q30優(yōu)質(zhì)讀占比基本持平,測(cè)序堿基可靠性均有保障。
充足的數(shù)據(jù)產(chǎn)出與更高的覆蓋深度,讓細(xì)菌基因組分析結(jié)果更精準(zhǔn)、更全面。
四、平臺(tái)核心優(yōu)勢(shì),適配臨床&科研實(shí)驗(yàn)室
操作簡(jiǎn)單易上手:程序編寫、修改、運(yùn)行門檻低,快速落地現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)體系;
設(shè)備布局靈活:機(jī)身占地面積小,搭配定制化觸控屏幕,適配各類實(shí)驗(yàn)室空間;
流程高度兼容:匹配主流NGS文庫(kù)制備試劑盒,通用度廣;
專業(yè)技術(shù)支持:原廠配套服務(wù),保障實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定運(yùn)行。
五、總結(jié)
從人力成本、耗材消耗,到文庫(kù)質(zhì)控、上機(jī)測(cè)序,Hamilton Microlab PuriFY自動(dòng)化DNA純化系統(tǒng)全面優(yōu)于傳統(tǒng)手工操作。它不僅解決了細(xì)菌全基因組測(cè)序文庫(kù)純化的人工痛點(diǎn),更顯著提升測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量與實(shí)驗(yàn)重復(fù)性,是高通量NGS實(shí)驗(yàn)室提質(zhì)增效的理想選擇。
無論是基礎(chǔ)科研、病原微生物檢測(cè),還是規(guī)模化樣本測(cè)序項(xiàng)目,這款自動(dòng)化平臺(tái)都能為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!
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